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高通量組織研磨儀分析南瓜雜交種純度

來源： http://m.siela.cn/ 　類別：技術文章　更新時間：2015-07-22　閱讀次

　　在水稻、玉米、大豆、油菜等重要農作物上,SSR標記技術已成為一種普遍采用的純度鑒定方法。SSR標記由于具有數量豐富，多態性高，共顯性遺傳，操作簡便，結果穩定可靠等優點,已成為當今作物品種純度鑒定的理想標記類型。且快速簡便SSR檢測方法也被研究建立起來，"南瓜SSR標記開發較遲,目前主要用于遺傳連鎖圖譜的構建，基因定位等基礎研究方面,而在應用研究上較少。高通量組織研磨儀可以在研究制樣品種發揮重要的作用。
　　
　　將種子浸種lh后,置于墊有濾紙的發芽盒,37e,并注意保濕"發芽5一6天左右,取單粒發芽種子的胚軸約.05cm,放到.20mL離心管中,高通量組織研磨儀研碎;加入600林LCATB提取液,65e水浴10mni;加入等體積氯仿:異戊醇(24:1),充分倒置混勻約10min,于120001丫11〕in離心10min;取上清液,加等體積預冷的異丙醇混勻(輕輕倒轉),于常溫下放置約30min,1200Or力1〕in離心10min;棄上清液,倒置使其自然風干或置于超凈工作臺讓其吹干,加入適量ddHZO溶解備用"
　　
　　通過高通量組織研磨儀的參與研究，簡便SSR檢測體系比常規SSR檢測體系更簡單實用,但也存在提取的基因組DNA量較少!不易于長時間保存的缺點"此外,雖然本研究所用的檢測體系相對于常規檢測體系大大減少了試劑用量,但理論上,在保障點樣量的前提下,還可將PCR反應體系進一步減小;為提高檢測效率,還可探索采用多重PCR,以便同時檢測多個位點的差異,因此,擴增體系還可進一步優化"在電泳檢測時,本研究僅點樣1次,對于合適引物的擴增產物,可以探索點樣2次甚至多次,以便節約制膠成本,這方面的工作尚需根據擴增產物大小進一步摸索。